Το 1309 οι Ιωαννίτες Ιππότες κατέλαβαν τη Ρόδο. Οι Ιωαννίτες ήταν το θρησκευτικό τάγμα του Αγίου Ιωάννη που είχε συσταθεί στα Ιεροσόλυμα με σκοπό την επέκταση στη Μέση Ανατολή. Οι μουσουλμάνοι τους απέκρουσαν και οι Ιωαννίτες, αφού κατέφυγαν αρχικά στην Κύπρο, εγκαταστάθηκαν στη Ρόδο και ονομάστηκαν «Ιππότες της Ρόδου».
Τους δύο αιώνες που έμειναν στο νησί πραγματοποίησαν σημαντικά οχυρωματικά έργα για να προστατευτεί η πόλη από τις συνεχείς επιθέσεις των Τούρκων. Οι Ιωαννίτες ήταν χωρισμένοι σε επτά διαφορετικές «Γλώσσες» και κάθε «Γλώσσα» είχε τον δικό της χώρο μέσα στο κάστρο.
Υπό την κυριαρχία τους η Ρόδος μετατράπηκε σε σημαντικό ναυτικό πέρασμα, το οποίο ο Σουλτάνος της Οθωμανικής Αυτοκρατορίας, Σουλειμάν ο Μεγαλοπρεπής, ήθελε οπωσδήποτε να κατακτήσει.

Η πρώτη μεγάλη πολιορκία της Ρόδου από τον στόλο των Οθωμανών πραγματοποιήθηκε το 1480. Οι Ιωαννίτες οχυρωμένοι στα ψηλά φρούρια της πόλης απέκρουσαν με επιτυχία τις επιθέσεις.
Οι Τούρκοι με εντολή του Σουλεϊμάν του Μεγαλοπρεπή επανήλθαν τον Ιούνιο του 1522 με έναν στόλο από 400 πλοία και εκατό χιλιάδες άντρες.

Ο στρατός των Ιπποτών της Ρόδου αποτελούταν από 300 Ιωαννίτες και 5.000 άντρες.
Παρά την αριθμητική υπεροχή των Τούρκων, οι Ιωαννίτες κατάφεραν και τους απέκρουσαν στους προμαχώνες, προκαλώντας τους χιλιάδες απώλειες. Ακολούθησαν μάχες σώμα με σώμα και συνεχείς βομβαρδισμοί από τους Τούρκους, που σκοπό είχαν να πλήξουν τα ισχυρά οχυρά της πόλης.
Μάλιστα, όταν ο Σουλεϊμάν έμαθε πως οι Ιωαννίτες προκάλεσαν απώλειες στον οθωμανικό στρατό, ταξίδεψε στη Ρόδο και ηγήθηκε προσωπικά της πολιορκίας του νησιού. Πρώτη του απαίτηση ήταν η άμεση κατάληψη των οχυρών.

Μετά από πέντε μήνες αλλεπάλληλων επιθέσεων, τα εφόδια των πολιορκημένων τελείωναν και ο δυνάμεις τους είχαν εξαντληθεί. Η βοήθεια που είχαν ζητήσει από την Δύση δεν ήρθε ποτέ και τελικά η αντίσταση τους κάμφθηκε. Οι Ιωαννίτες διαπραγματεύτηκαν τη διαφυγή τους από τη Ρόδο και συνθηκολόγησαν με τους Τούρκους.

Οι όροι της συνθηκολόγησης ήταν:
Οι Ιωαννίτες μπορούσαν να αποχωρήσουν, παίρνοντας μαζί τα όπλα και τα υπάρχοντά τους.
Οι εκκλησίες δεν θα βεβηλώνονταν και θα υπήρχε ανεξιθρησκία.
Ο Σουλτάνος θα χορηγούσε φοροαπαλλαγή για 5 χρόνια και δεν θα γινόταν παιδομάζωμα.
Οι Ιωαννίτες παρέδωσαν τη πόλη στους Τούρκους και βρήκαν μετά από περιπλάνηση στη Μεσόγειο, καταφύγιο στο νησί της Μάλτας.
Τους επόμενους αιώνες η Ρόδος ήταν υπό την κυριαρχία της Οθωμανικής κυριαρχίας.

H εποχή των συγκρούσεων των Ιωαννιτών ιπποτών με τον Σουλεϊμάν τον Μεγαλοπρεπή αναβιώνεται κάθε Μάϊο στο Μεσαιωνικό Φεστιβάλ της Ρόδου.
Για να είναι πιστή η αναπαράσταση της μεσαιωνικής Ρόδου, οι συμμετέχοντες ντύνονται όπως οι ιππότες, οι στρατιώτες, οι έμποροι και οι αγρότες της εποχής.
Τα δρώμενα πραγματοποιούνται στη μεσαιωνική πόλη της Ρόδου, που παραμένει όπως την εποχή που ήταν το κέντρο του Ιπποτικού κράτους των Ιωαννιτών.